Маргарита была старшей дочерью Генриха VII и Елизаветы Йоркской. Она родилась 28 ноября 1489 года в Лондоне. У Генриха и Елизаветы было еще несколько детей, из которых выжили только Артур (принц Уэльский и наследник престола), Генрих (будущий король Генрих VIII) и Мария.
Генрих VII предпочитал дипломатические союзы войне, а потому для его детей практически с самого рождения были уготованы политически выгодные браки. Маргариту как старшую дочь пообещали выдать за Якова IV, короля Шотландии. Яков долго добивался этого союза: их брачный контракт стал одним из важнейших пунктов мирного договора, подписанного странами в 1502 году после более 170 лет вражды. Таким образом, с самого нежного возраста Маргариту готовили к роли шотландской королевы.
Примерно через полгода после смерти матери, летом 1503-го, Маргарита отправилась в Шотландию, где ей предстояло сочетаться браком. 13-летняя невеста очень понравилась Якову и его двору: стройная, с копной рыжеватых волос и приятными, мягкими чертами лица девушка светилась здоровьем, молодостью и красотой. Генрих VII снабдил её роскошным гардеробом и дорогими украшениями, которые она регулярно демонстрировала на публике. Посыл был таков: дочь дома Тюдоров принесёт Шотландии успех и процветание.
Якову на тот момент было 30 лет — разница в возрасте значительная, особенно учитывая, что Маргарита всё ещё являлась ребёнком. Она тосковала по дому, о чём прямо говорила в своих письмах отцу, однако на приём в Шотландии пожаловаться не могла: Яков окружил её богатством и неслыханной роскошью, а также довольно скоро сумел завоевать доверие и расположение девушки.
Свадьба состоялась 8 августа 1503 года. Яков не скупился и потратил огромную сумму на торжество: только на вино ушла четверть его личного годового дохода.
Последующие десять лет жизни в Шотландии были относительно спокойными для Маргариты: с согласия мужа она попыталась провести небольшую культурную революцию при дворе. Яков и Маргарита привечали поэтов, музыкантов и творческих людей. Как король, Яков IV был достаточно популярен в народе, он гордился широтой своих интересов, которые простирались от военного дела до медицины и искусства.
Маргарита родила шестерых детей, но младенчество пережил только Яков (дата рождения — 10 апреля 1512 года), будущий король Яков V.
Несмотря на подписание мирного договора между Англией и Шотландией, хрупкий мир был нарушен с приходом к власти Генриха VIII. Назревала война Англии с Францией, и Яков должен был выступить союзником французов, согласно договоренностям 1512 года. Отношения между Генрихом и Маргаритой были весьма натянутыми: в письмах молодой королевы нередко проскальзывают обидные и гневные фразы. Так, например, своё негодование Маргарита выразила, когда Генрих решил не отдавать ей наследство, завещанное отцом и покойным братом Артуром. Политические противоречия только подогревали их родственную вражду. Когда Англия пошла войной на Францию, Яков IV отправил шотландский флот на помощь союзникам, а сам повёл войско к английским границам. В битве при Флоддене погибли десятки тысяч шотландцев, в их числе и сам король. Маргарита, на тот момент беременная их последним ребёнком, осталась вдовой в 23 года.
Согласно завещанию Якова, его супруга должна была стать регентом при малолетнем Якове V, но с одним условием: Маргарита не могла выйти замуж. В противном случае она бы лишилась прав на регентство. Шотландских аристократов не очень-то устраивала англичанка-регентша, да ещё и родная сестра политического врага. Местная знать полагала, что на эту роль лучше подходит кто-то из «своих», например, Джон Стюарт, 2-й герцог Олбани, двоюродный брат Якова IV и дядя маленького Якова V. На тот момент он являлся следующим в очереди на престол после сына Маргариты. Какое-то время ей удавалось подавлять попытки поставить герцога Олбани на место регента: этому способствовало и очередное англо-шотландское перемирие. Однако позиция её шаткой. В апреле 1514 года родился Александр, сын Маргариты от Якова, а уже в августе она вышла замуж повторно: за Арчибальда Дугласа, 6-го графа Ангуса.
Вступив в брак, Маргарита нарушила условия завещания первого мужа и лишилась права регентства. Вероятно, при определённых условиях, на это могли бы закрыть глаза, если бы не репутация нового супруга. Дуглас был известен своей любовью ко всему английскому — их союз с Маргаритой не на шутку всполошил шотландских лордов, опасавшихся слишком сильного влияния Англии на их будущего короля. Было решено, что всё же герцог Олбани займёт позицию в качестве опекуна и наставника Якова V.
У Маргариты попытались в буквальном смысле отнять её сыновей, дабы поместить под надзор Олбани, — это действие было встречено решительным протестом и побегом женщины с мужем и детьми в замок Стерлинг. Олбани отправился на переговоры со вдовствующей королевой, осаду пришлось снять: Маргарита рассталась с Яковом и Александром, передав их в руки дяди. На тот момент женщина уже была беременна от нового супруга.
Генрих VIII, получив отчаянное послание сестры, в котором та описала их бедственное положение, предложил убежище в родной Англии, но Маргарита и Арчибальд решили остаться в Эдинбурге и не покидать территорию Шотландии, так как это могло пошатнуть положение Якова V.
Довольно скоро стало понятно, что в Шотландии им жизни не будет: Тайный совет следил за каждым шагом вдовствующей королевы и предписывал отчитываться обо всех передвижениях. Маргарита, будучи на поздних сроках беременности, и её муж тайно бежали в Англию, где их встретил один из доверенных людей Генриха. Практически сразу после прибытия в Нортумберленд, в октябре 1515 года, она родила дочку Маргариту. Роды протекали очень тяжело, и женщина приходила в себя больше месяца, а в декабре пришло известие о смерти её сына Александра. Эти невзгоды сказались как на физическом здоровье Маргариты, так и на её эмоциональном состоянии. Вдобавок ко всему, произошёл разлад с мужем. Арчибальд оставил жену в Англии, а сам вернулся в Шотландию, дабы заслужить прощение герцога Олбани и тем самым сохранить своё богатство в виде земель, титулов и прочих владений. В Шотландии Арчибальд сошёлся со своей бывшей возлюбленной леди Джейн Стюарт, о чём его жена узнала не сразу.
Проведя год в Англии, Маргарита решила, что пришло время возвращаться в Шотландию: герцог Олбани гарантировал ей безопасность, да и Генрих намекал сестре, что пора бы и честь знать — её присутствие было важнее там, за границей. В Шотландии Маргарита узнала об интрижке мужа, а также о том, что Арчибальд оплачивал свои развлечения из личного кошелька жены. Вероятно, это стало поводом для развода, что само по себе было явлением весьма редким. О своих намерениях Маргарита заявила в письме к брату, однако Генрих, всё ещё ревностный католик, пребывающий в браке с первой женой Екатериной Арагонской, отвергал идею развода как таковую. Более того, граф Ангус был нужен Генриху как проводник английских интересов в Шотландии. Маргарита решила действовать через герцога Олбани, используя его связи в Риме. Но за свою свободу ей пришлось воевать годами.
Арчибальд открыто жил с новой возлюбленной и их совместным ребёнком, всё ещё номинально являясь мужем вдовствующей королевы. Маргарита же направила усилия на укрепление положения своего сына. В 1524 году, вступив в сговор с могущественными шотландскими семьями, она заставила парламент признать 12-летнего Якова достаточно взрослым, чтобы править самостоятельно, без вмешательства регента. Фактически Маргарита совершила государственный переворот, свергнув Олбани, пока тот пребывал во Франции. Ко всеобщему удивлению, даже несмотря на этот поступок, Олбани и Маргарита сохранили весьма дружеские отношения, и герцог не оставил попыток добиться для неё в Риме развода. А вот граф Ангус не желал мириться со своеволием жены: в 1525 году, заручившись поддержкой сторонников, Арчибальд хитростью и обманом назначил себя опекуном юного короля сроком на три года. То есть Яков V должен был считаться с мнением отчима и действовать согласно его рекомендациям.
В 1527 году Маргарита получила долгожданный развод: разрешение было подписано Папой Римским Климентом VII. В марте 1528 года она снова вышла замуж: на этот раз за Генри Стюарта, приближённого Якова V. Их отношения, по слухам, начались годами ранее. Маргарита заручилась благословением своего сына, который в 1528 году наконец-то освободился от опекунства ненавистного ему отчима. Как только полномочия графа Ангуса завершились, он бежал в Англию, где, к большому недовольству королевы и её сына, был радушно принят Генрихом VIII.
Маргарита чувствовала себя несчастной: её политическая миссия миротворца провалилась. Попытки наладить отношения между сыном и братом не увенчались успехом: Яков не доверял Генриху, привечавшему ненавистного графа Ангуса, а Генрих — Якову, не желавшему более прислушиваться к чьим-либо советам и выпавшему из-под английского влияния. Новый брак Маргариты обернулся очередным разочарованием: Генри Стюарт оказался бабником, гулякой и транжирой и с удовольствием разбазаривал средства супруги. Она вновь подумывала о разводе, но против выступил Яков.
Единственное утешение в свои последние годы Маргарита нашла в дружбе с невесткой Марией де Гиз. Вторая жена Якова (первая умерла через полгода после свадьбы) сочувствовала свекрови и обеспечила ей радушный и тёплый приём при дворе. У Якова и Марии было трое детей, но двое первых, мальчики, умерли ещё во младенчестве, выжила лишь дочь Мария Стюарт.
Маргарита скончалась 18 октября 1541 года, предположительно, от паралича, последовавшего за инсультом. Ей был 51 год. Сын ненадолго пережил её: Яков V умер в декабре 1542-го, оставив крохотную Марию Стюарт наследницей шотландского престола. Меньше чем через столетие мечта Маргариты о мире между Англией и Шотландией наконец осуществится: её правнук Яков VI Шотландский станет также и Яковом I Английским, объединив, таким образом, две короны.