Изабелла родилась 22 апреля 1451 года в семье Хуана II, короля Кастилии. В 18 лет она тайно венчалась с Фердинандом, принцем Арагонским. Поход в церковь стал авантюрой — жених и невеста переоделись в купцов и подделали разрешение от Папы на венчание. В 1474-м Изабелла провозгласила себя королевой. Фердинанд получил широкие полномочия по управлению Кастилией. Одним из первых нововведений Изабеллы стала полиция, или «Святая Эрмандада». Она формировалась из числа местных жителей. Так города защищали себя от бандитов и произвола дворян. Во главе этого органа стали Фердинанд и Изабелла. «Эрмандада» широко использовалась для борьбы с мятежными феодалами. Жители платили налоги на содержание «братства». Полиция также следила за безопасностью дорог, что имело большое значение для торговцев. Позже «Эрмандада» слилась с аппаратом инквизиции.
Укреплению центральной власти также способствовала «мобильность» Фердинанда и Изабеллы. Они постоянно путешествовали из города в город, процедура подачи прошения на имя монарха была достаточно простой. Важным этапом на пути становления единой Испании Изабелла и Фердинанд считали изгнание иноверцев. Альгамбрский эдикт 1492 года обзывал евреев принять католическую веру, в противном случае они должны были покинуть Испанию. В ходе реализации эдикта на кострах инквизиции оказались более 13 тысяч человек. Принятие христианства не гарантировало спасение — «плохих» новообращенных бросали в тюрьмы и подвергали мучительным пыткам. Первый великий инквизитор Испании Томас Торквемада, личный духовник Изабеллы, заботился также о конфискации их имущества. Иноверцев преследовали за тайные обряды. Торквемада имел огромное влияние не только на королеву, но и на ее супруга. На кострах сжигали и литературу — еврейские и арабские книги. В одном только 1480-м были казнены около 300 еретиков. Изабелла и Фердинанд утвердили структуру аппарата инквизиции; были созданы центральный инквизиционный совет и местные трибуналы. Токвемада занимал пост великого инквизитора на протяжении 15 лет. После его смерти из Испании были также изгнаны мавры.
Важнейшим событием в эпоху правления Изабеллы и Фердинанда стало открытие Америки. Королева распорядилась выделить средства на экспедицию Христофора Колумба. Богатства Нового Света сделали Испанию процветающей державой.
Изабелла Кастильская, энергичная и неутомимая в молодости, со временем стала предпочитать одиночество и отдых от государственных дел. Королева скончалась 26 ноября 1504 года. В завещании она указала наследницей дочь Хуану, которая с детских лет отличалась неуравновешенностью. После заключения брака с герцогом Бургундии Филиппом Красивым Хуана начала страдать истерическими припадками. Позже она впала в сильную депрессию с приступами бешенства. По мнению ученых, возможно, королева страдала шизофренией.